AAT Bioquest1255 ReadiLink™ Rapid iFluor® 488 Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 50 µg Antibody Per Reaction* 

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美國AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學(xué)研究、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學(xué)家研發(fā)、生產(chǎn)和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術(shù)。AAT Bioquest的產(chǎn)品幫助quan世界的科學(xué)家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學(xué)，免疫學(xué)，細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等領(lǐng)域。AAT Bioquest會(huì)不斷介紹新產(chǎn)品，快速的豐富各個(gè)領(lǐng)域的產(chǎn)品。

 AATReadiLinkRapidiFluor488抗體標(biāo)記試劑盒

AAT Bioquest1255 ReadiLink™ Rapid iFluor® 488 Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 50 µg Antibody Per Reaction*，產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品品牌：AAT Bioquest

產(chǎn)品貨號(hào)：1255

產(chǎn)品名稱：ReadiLink™Rapid iFluor®488抗體標(biāo)記試劑盒*用于標(biāo)記50微米的微型優(yōu)化；g每個(gè)反應(yīng)的抗體*

英文名稱：ReadiLink™ Rapid iFluor® 488 Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 50 µg Antibody Per Reaction*

產(chǎn)品規(guī)格：2 Labelings

產(chǎn)品說明：

盡管FITC仍然是制備綠色熒光生物偶聯(lián)物zui常用的熒光標(biāo)記染料，但FITC存在一定的局限性，例如顯微鏡成像的嚴(yán)重光漂白和pH敏感熒光。與熒光素衍生物（如FITC）的偶聯(lián)物相比，用iFluor® 488染料制備的蛋白質(zhì)偶聯(lián)物要*得多。iFluor® 488偶聯(lián)物比熒光素偶聯(lián)物明顯更亮，并且更易于光化。此外，iFluor® 488的熒光不受pH值（4-10）的影響。這種pH不敏感性是對(duì)熒光素的重大改進(jìn)，熒光素僅在pH高于9時(shí)發(fā)出最大熒光。ReadiLink™ 標(biāo)記試劑盒基本上只需要 2 個(gè)簡(jiǎn)單的混合步驟，無需色譜柱純化。該ReadiLink™試劑盒中使用的iFluor® 488 SE相當(dāng)穩(wěn)定，并且對(duì)蛋白質(zhì)氨基基團(tuán)具有良好的反應(yīng)性和選擇性。該試劑盒具有標(biāo)記~2x50 ug抗體的所有基本成分。試劑盒中提供的兩瓶iFluor® 488染料中的每一個(gè)都針對(duì)標(biāo)記~50 μg抗體進(jìn)行了優(yōu)化。iFluor 488 SE蛋白標(biāo)記試劑盒提供了一種使用iFluor®® 10 SE標(biāo)記單克隆、多克隆抗體或其他蛋白（>488 kDa）的便捷方法。 

組件

組分 A：iFluor™ 488 2 個(gè)小瓶（一個(gè)小瓶用于 50 μg 蛋白質(zhì)）

組分B：反應(yīng)緩沖液 1 瓶 （20 μL）

組分C：TQ™染色淬火緩沖液 1 瓶 （20 μL）

示例協(xié)議

一目了然

重要

在打開之前加熱所有組分并短暫離心小瓶，并在開始偶聯(lián)之前立即準(zhǔn)備所需的溶液。以下協(xié)議僅供參考。

工作溶液的制備

蛋白質(zhì)工作溶液（溶液A）

要標(biāo)記 50 μg 蛋白質(zhì)（假設(shè)目標(biāo)蛋白質(zhì)濃度為 1 mg/mL），請(qǐng)將 5 μL（占總反應(yīng)體積的 10%）反應(yīng)緩沖液（組分 B）與 50 μL 目標(biāo)蛋白質(zhì)溶液混合。

注意 如果您的蛋白質(zhì)濃度不同，請(qǐng)相應(yīng)地調(diào)整蛋白質(zhì)體積，使 ~50 μg 蛋白質(zhì)可用于標(biāo)記反應(yīng)。

注意 要標(biāo)記 100 μg 蛋白質(zhì)（假設(shè)目標(biāo)蛋白質(zhì)濃度為 1 mg/mL），請(qǐng)將 10 μL（占總反應(yīng)體積的 10%）反應(yīng)緩沖液（組分 B）與 100 μL 目標(biāo)蛋白質(zhì)溶液混合。

注意蛋白質(zhì)應(yīng)溶解在1X磷酸鹽緩沖鹽水（PBS），pH 7.2 - 7.4中;如果蛋白質(zhì)溶解在甘an酸緩沖液中，則必須對(duì)1X PBS，pH 7.2 - 7.4進(jìn)行透析，或使用Amicon Ultra-0.5，Ultracel-10膜，10 kDa（來自密理博的cat#UFC501008）去除廣泛用于蛋白質(zhì)沉淀的游離胺或銨鹽（如**銨和乙**）。

注意 不純抗體或用牛血清白蛋白 （BSA） 或明膠穩(wěn)定的抗體不會(huì)很好地標(biāo)記。

注意 為了獲得最佳標(biāo)記效率，建議最終蛋白質(zhì)濃度范圍為 1 - 2 mg/mL，當(dāng)偶聯(lián)效率低于 1 mg/mL 時(shí)會(huì)顯著降低。

實(shí)驗(yàn)方案樣本

運(yùn)行偶聯(lián)反應(yīng)

1. 將蛋白質(zhì)工作溶液（溶液A）添加到一瓶標(biāo)記染料（組分A）中，并通過重復(fù)移液幾次或渦旋小瓶幾秒鐘來充分混合。

注意 如果標(biāo)記 100 μg 蛋白質(zhì)，請(qǐng)使用兩個(gè)標(biāo)記染料的小瓶（組分 A），方法是將 100 μg 蛋白質(zhì)分成 2 x 50 μg 蛋白質(zhì)，并將每 50 μg 蛋白質(zhì)與一瓶標(biāo)記染料反應(yīng)。然后將兩個(gè)小瓶合并以進(jìn)行下一步。

2. 將偶聯(lián)反應(yīng)混合物在室溫下保持30-60分鐘。

注意 如果需要，共軛反應(yīng)混合物可以旋轉(zhuǎn)或搖動(dòng)更長(zhǎng)的時(shí)間。

停止偶聯(lián)反應(yīng)

1. 將 5 μL（用于 50 μg 蛋白質(zhì)）或 10 μL（用于 100 μg 蛋白質(zhì)）添加到共軛反應(yīng)混合物中，占 TQ™ 染色淬滅緩沖液（組分 C）總反應(yīng)體積的 10%;混合均勻。

2. 在室溫下孵育10分鐘。標(biāo)記的蛋白質(zhì)（抗體）現(xiàn)在可以使用了。

蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的儲(chǔ)存

蛋白偶聯(lián)物應(yīng)在載體蛋白（例如 0.5% 牛血清白蛋白）存在下儲(chǔ)存在 > 0.1 mg/mL 下。為了延長(zhǎng)儲(chǔ)存時(shí)間，蛋白質(zhì)偶聯(lián)物可以凍干或分成一次性等分試樣，并在≤ –20°C下儲(chǔ)存。

 AATReadiLinkRapidiFluor488抗體標(biāo)記試劑盒

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