AAT Bioquest 10056 Amplite® Fluorimetric Glutathione GSH/GSSG Ratio Assay Kit *Green Fluorescence* 200Tests

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美國(guó)AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學(xué)研究、診斷研發(fā)及藥物開(kāi)發(fā)的科學(xué)家研發(fā)、生產(chǎn)和銷(xiāo)售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術(shù)。AAT Bioquest的產(chǎn)品幫助quan世界的科學(xué)家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學(xué)，免疫學(xué)，細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等領(lǐng)域。AAT Bioquest會(huì)不斷介紹新產(chǎn)品，快速的豐富各個(gè)領(lǐng)域的產(chǎn)品。

AAT Bioquest 10056 Amplite® Fluorimetric Glutathione GSH/GSSG Ratio Assay Kit *Green Fluorescence* 200Tests，產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品品牌：AAT Bioquest

產(chǎn)品貨號(hào)：10056

產(chǎn)品名稱(chēng)：Amplite®熒光谷胱gan肽GSH/GSSG比值測(cè)定試劑盒*綠色熒光*

英文名稱(chēng)：Amplite® Fluorimetric Glutathione GSH/GSSG Ratio Assay Kit *Green Fluorescence*

產(chǎn)品規(guī)格：200 Tests

AAT 熒光谷胱gan肽GSH/GSSG比值測(cè)定試劑盒

產(chǎn)品說(shuō)明：

當(dāng)細(xì)胞暴露于增加的氧化應(yīng)激水平時(shí)，GSSG會(huì)積聚，GSH與GSSG的比例會(huì)降低。谷胱gan肽還原酶將GSSG回收為GSH，同時(shí)氧化b-煙酰an腺嘌呤二核苷酸磷酸鹽。GSH / GSSG比率的監(jiān)測(cè)和生物樣品中GSSG的定量對(duì)于評(píng)估細(xì)胞和組織的氧化還原和解毒狀態(tài)至關(guān)重要，這與谷胱gan肽對(duì)氧化和自由基介導(dǎo)的細(xì)胞損傷的保護(hù)作用有關(guān)。有一些試劑或檢測(cè)試劑盒可用于生物系統(tǒng)中硫醇的定量。然而，所有商業(yè)試劑盒要么缺乏靈敏度，要么協(xié)議繁瑣。我們的 Amplite® 熒光法 GSH/GSSG 比率試劑盒提供了一種超靈敏的檢測(cè)方法，可定量樣品中的 GSH。該試劑盒使用專(zhuān)有的非熒光染料，在與硫醇反應(yīng)時(shí)會(huì)發(fā)出強(qiáng)烈的熒光。該試劑盒提供了一種靈敏的一步熒光方法，可在 1 μL 測(cè)定體積中檢測(cè)低至 100 皮摩爾的半胱an酸或 GSH。該測(cè)定可以以方便的 96 孔或 384 孔微量滴定板形式進(jìn)行，無(wú)需分離步驟即可輕松適應(yīng)自動(dòng)化。熒光酶標(biāo)儀可以輕松讀取其信號(hào)。

組件

組分A：硫石™綠 1瓶

組分B：檢測(cè)緩沖液 1 瓶 （25 mL）

組件C：GSH標(biāo)準(zhǔn) 1 瓶 （62 μg）

組件D：二甲基丙烯酸甲醇 1 瓶 （400 μL）

組件E：GSSG探頭 1瓶（凍干粉）

組件F：GSSG標(biāo)準(zhǔn) 1 瓶 （124 μg）

示例協(xié)議

一目了然

重要提示 關(guān)于GSH：GSSG的測(cè)定，記住以下等式很重要：

GSSG -> 還原 -> 2 GSSH

對(duì)于GSSG的每個(gè)氧化還原，產(chǎn)生兩摩爾GSH。因此，在數(shù)據(jù)分析期間確定 [總 GSH] 時(shí)，重要的是要記住 [總 GSH] = 2 x [GSSG]。例如，如果特定井的[GSSG]標(biāo)準(zhǔn)為5 uM，則該井的[總GSH]應(yīng)使用10 uM計(jì)算。

協(xié)議摘要

1. 制備GSH標(biāo)準(zhǔn)品和/或GSSG標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品（50 μL）

2. 加入谷胱an肽工作溶液（50 μL）

3. 在室溫下孵育 10 至 60 分鐘

4. 監(jiān)測(cè)Ex/Em = 490/520 nm處的熒光增加

重要事項(xiàng) 在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分。

儲(chǔ)備溶液的制備

除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

1. 谷胱an肽標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 mM）

將 200 μL 檢測(cè)緩沖液（組分 B）加入 GSH 標(biāo)準(zhǔn)品（組分 C）小瓶中，制成 1 mM （1 nmol/μL） GSH 標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2. GSSG 標(biāo)準(zhǔn)溶液 （1 mM）

加入 200 μL ddH2O 放入 GSSG 標(biāo)準(zhǔn)品（組分 F）的小瓶中，制成 1 mM （1 nmol/μL） GSSG 標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3. 硫石™綠色儲(chǔ)備液（100X）

將 100 μL DMSO（組分 D）加入硫石綠（組分 A）小瓶中，制成 100X 硫石™™綠儲(chǔ)備溶液。注意：可以添加 200 μL DMSO 以制成 50 X 硫石™綠色儲(chǔ)備溶液，以獲得更好的溶解度。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

GSH 或 GSSG 標(biāo)準(zhǔn)

制備連續(xù)稀釋的GSH標(biāo)準(zhǔn)品（0至10μM）：將10μLGSH標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液加入990μL測(cè)定緩沖液（組分B）中，以生成10μM GSH標(biāo)準(zhǔn)溶液（GSH7）。注意：稀釋的GSH標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定。4小時(shí)內(nèi)用完。取10μM GSH標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行1：2連續(xù)稀釋?zhuān)玫?、2.5、1.25、0.625、0.3125和0.1563連續(xù)稀釋的GSH標(biāo)準(zhǔn)品（GSH6-GSH1）。制備連續(xù)稀釋的GSSG標(biāo)準(zhǔn)品（0至5μM）：將10μLGSSG標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液加入990μL測(cè)定緩沖液（組分B）中，以產(chǎn)生10 μM GSSG標(biāo)準(zhǔn)溶液。注意：稀釋的GSSG標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定。4小時(shí)內(nèi)用完。取10μM GSSG標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行1：2系列稀釋?zhuān)玫?、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.1563和0.0781連續(xù)稀釋的GSSG標(biāo)準(zhǔn)品（GSSG7-GSSG1）。

工作溶液的制備

1. GSH工作解決方案

將 100 μL 100X 硫石™綠色儲(chǔ)備溶液加入 10 mL 檢測(cè)緩沖液（組分 B）中，并通過(guò)渦旋充分混合。注意：這種GSH工作溶液（GSH-WS）足以用于兩個(gè)96孔板。常溫下不穩(wěn)定，2小時(shí)內(nèi)應(yīng)及時(shí)使用。注意：避免暴露在光線(xiàn)下。[/注釋]

注意 或者，可以通過(guò)按比例添加100X硫石™綠儲(chǔ)備溶液和測(cè)定緩沖液來(lái)制備GSH工作溶液。

2. 總GSH工作解決方案

將 5 mL GSH-WS 加入 GSSG 探頭（組分 E）瓶中，并通過(guò)渦旋充分混合。注意：這種總GSH工作溶液（TGSH-WS）足以用于一個(gè)96孔板。常溫下不穩(wěn)定，應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)及時(shí)使用，避免避光。注意：或者，可以通過(guò)添加 25 μL ddH 來(lái)制作 200X GSSG 探頭2O放入組分E的瓶中，然后將儲(chǔ)備溶液與GSH-WS按比例混合來(lái)制備TGSH-WS。

AAT 熒光谷胱gan肽GSH/GSSG比值測(cè)定試劑盒

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