AAT Bioquest 10070/10071 Amplite® Colorimetric/Fluorimetric Malondialdehyde (MDA) Quantitation Kit

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美國AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學(xué)研究、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學(xué)家研發(fā)、生產(chǎn)和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學(xué)檢測領(lǐng)域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術(shù)。AAT Bioquest的產(chǎn)品幫助quan世界的科學(xué)家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學(xué)，免疫學(xué)，細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等領(lǐng)域。AAT Bioquest會不斷介紹新產(chǎn)品，快速的豐富各個領(lǐng)域的產(chǎn)品。

AAT Bioquest 10070 Amplite® Colorimetric Malondialdehyde (MDA) Quantitation Kit  200 Tests

AAT Bioquest  10071  Amplite® Fluorimetric Malondialdehyde (MDA) Quantitation Kit 200 Tests

 AAT Amplite比色法/熒光法丙二醛（MDA）

AAT Bioquest 10070 Amplite® Colorimetric Malondialdehyde (MDA) Quantitation Kit  200 Tests，產(chǎn)品說明：

丙二醛（MDA）是脂質(zhì)過氧化的天然副產(chǎn)物，被廣泛用作確定氧化應(yīng)激和自由基形成的關(guān)鍵指標(biāo)。MDA的測量歷來依賴于與硫代巴比tuo酸（TBA）的反應(yīng)，以產(chǎn)生可以通過比色法或熒光法測量的化合物。但該測定不是MDAte有的，也可以在90-100°C的酸性條件下進(jìn)行。 已經(jīng)有許多商業(yè)ELISA試劑盒，這使得它更加昂貴和乏味。Amplite® 比色丙二醛 （MDA） 定量試劑盒提供了最快速、zui方便的 MDA 測量方法，無需 TBAR 加熱步驟。MDA藍(lán)色與MDA反應(yīng)生成藍(lán)色™產(chǎn)物，用吸光度酶標(biāo)儀在695nm處測量。該測定非常快速且對MDA具有特異性，幾乎不受其他醛類的干擾。

組件

組件 A：MDA 藍(lán)色™ 1瓶

組分B：稀釋緩沖液 1 瓶 （10 mL）

組件C：MDA標(biāo)準(zhǔn) 1瓶（凍干粉）

組分D：反應(yīng)溶液 1 瓶 （10 mL）

示例協(xié)議

一目了然

協(xié)議摘要

1. 制備測試樣品以及連續(xù)稀釋的MDA標(biāo)準(zhǔn)品（50 μL）

2. 加入 MDA 藍(lán)色™儲備溶液 （10 μL）

3. 在室溫下孵育 10 - 30 分鐘

4. 加入反應(yīng)溶液 （40 μL）

5. 監(jiān)測 695 nm 處的外徑增加

重要說明

在開始實(shí)驗(yàn)之前，請?jiān)谑覝叵陆鈨鏊薪M分。

儲備液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

1. MDA標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 mM）：

加入100 μL ddH2O放入MDA標(biāo)準(zhǔn)小瓶（組分C）中，制成100 mM MDA儲備溶液。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

MDA標(biāo)準(zhǔn)

將 4 μL 100 mM MDA 標(biāo)準(zhǔn)品加入 996 μL 稀釋緩沖液（組分 B）中，得到 400 μM MDA 溶液 （MDA7）。然后在稀釋緩沖液中進(jìn)行1：2連續(xù)稀釋，以獲得連續(xù)稀釋的MDA標(biāo)準(zhǔn)品（MDA6 - MDA1）。

實(shí)驗(yàn)方案樣本

表 1.MDA標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品在96孔透明底部微孔板中的布局。MDA=MDA標(biāo)準(zhǔn)品（MDA1 - MDA7，6.25至400μM），BL=空白對照，TS=測試樣品。

提單 提單 TS TS

MDA1 MDA1 ... ...

MDA2 MDA2 ... ...

MDA3 MDA3    

MDA4 MDA4    

MDA5 MDA5    

MDA6 MDA6    

MDA7 MDA7    

表 2.每個孔的試劑組成。

井 卷 試劑

MDA1 - MDA7 50 微升 連續(xù)稀釋（6.25 至 400 μM）

提單 50 微升 稀釋緩沖液（組分B）

TS 50 微升 測試樣品

1. 根據(jù)表1和表2中提供的布局制備MDA標(biāo)準(zhǔn)品（MDA），空白對照（BL）和測試樣品（TS）。對于 384 孔板，每孔使用 25 μL 試劑而不是 50 μL。

2. 將 10 μL MDA 藍(lán)™（組分 A）溶液添加到 MDA 標(biāo)準(zhǔn)品、空白對照和測試樣品的每個孔中。對于 384 孔板，在每個孔中使用 5 μL MDA 藍(lán)色™溶液。

3. 將反應(yīng)混合物在室溫下孵育10-30分鐘。

4. 加入 40 μL 反應(yīng)溶液（組分 D），使總測定體積為 100 μL/孔。對于 384 孔板，使用 20 μL 反應(yīng)溶液，總測定體積為 50 μL/孔。

5. 將最終反應(yīng)混合物在室溫下孵育30-60分鐘。

6. 使用吸光度讀數(shù)儀監(jiān)測吸光度增加，在OD為695~700nm處進(jìn)行路徑檢查校正。

AAT Bioquest  10071  Amplite® Fluorimetric Malondialdehyde (MDA) Quantitation Kit 200 Tests、產(chǎn)品說明：

丙二醛（MDA）和4-羥基壬烯醛（4-HNE）是脂質(zhì)過氧化的天然副產(chǎn)物。作為脂質(zhì)過氧化zui流行和zui可靠的生物標(biāo)志物，MDA多年來一直廣泛用于確定臨床情況下的氧化應(yīng)激。因此，MDA的定量對于評估病理生理過程中的氧化應(yīng)激至關(guān)重要。Amplite®熒光丙二醛（MDA）定量試劑盒提供了一種快速便捷的MDA測量方法，無需其他供應(yīng)商的商用MDA檢測試劑盒所需的加熱步驟。單醛藍(lán)™本身幾乎是無熒光的，但在與MDA反應(yīng)時會產(chǎn)生強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光。

組件

組分A：Monoaldelite^TMBlue 2瓶（凍干粉）

組分B：檢測緩沖液 1 瓶 （20 mL）

組件C：MDA標(biāo)準(zhǔn) 1瓶（凍干粉）

組分D：反應(yīng)溶液 1 瓶 （5 mL）

構(gòu)成部分E：DMSO 1 瓶 （100 μL）

示例協(xié)議

一目了然

協(xié)議摘要

1. 制備并添加MDA標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品（50 μL）

2. 制備并添加MDA工作溶液（50 μL）

3. 在室溫下孵育 10 至 30 分鐘

4. 加入反應(yīng)溶液 （25 μL）

5. 在室溫下孵育 30 至 60 分鐘

6. 監(jiān)測Ex/Em = 365/435 nm處的熒光強(qiáng)度

重要說明

在開始實(shí)驗(yàn)之前，將所有試劑盒組分解凍至室溫。

儲備液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

1. MDA標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 mM）：

加入100 μL ddH2O放入MDA標(biāo)準(zhǔn)品（組分C）的小瓶中，制成100 mM MDA標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2. Monoaldelite^TM藍(lán)色儲備液 （250X）：

將 20 μL DMSO（組分 E）加入一瓶Monoaldelite^TM藍(lán)色（組分A）制造Monoaldelite^TM藍(lán)色儲備溶液。注意：這Monoaldelite^TM藍(lán)色儲備溶液足以用于一個 96 孔板。它不穩(wěn)定，請及時使用。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

MDA標(biāo)準(zhǔn)

將 10 μL 100 mM MDA 標(biāo)準(zhǔn)溶液加入 990 μL 檢測緩沖液（組分 B）中，生成 1000 μM MDA 標(biāo)準(zhǔn)溶液 （MDA7）。取1000 μM MDA標(biāo)準(zhǔn)溶液（MDA7）并進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，以獲得帶有測定緩沖液（組分B）的連續(xù)稀釋的MDA標(biāo)準(zhǔn)品（MDA6 - MDA1）。

工作溶液的制備

Monoaldelite^TM藍(lán)色工作溶液：

加入 20 μL 250X Monoaldelite^TM將藍(lán)色儲備溶液放入 5 mL 檢測緩沖液（組分 B）中并充分混合。

實(shí)驗(yàn)方案樣本

表 1.MDA標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品在純黑色96孔微孔板中的布局。MDA=MDA標(biāo)準(zhǔn)品（MDA1 - MDA7，1.37至1000μM），BL=空白對照，TS=測試樣品。

提單 提單 TS TS

MDA1 MDA1 ... ...

MDA2 MDA2 ... ...

MDA3 MDA3    

MDA4 MDA4    

MDA5 MDA5    

MDA6 MDA6    

MDA7 MDA7    

表 2.每個孔的試劑組成。

井 卷 試劑

MDA1 - MDA7 50 微升 連續(xù)稀釋（1.37 至 1000 μM）

提單 50 微升 檢測緩沖液（組分B）

TS 50 微升 測試樣品

1. 根據(jù)表1和表2中提供的布局添加MDA標(biāo)準(zhǔn)品（MDA），空白對照（BL）和測試樣品（TS）。對于 384 孔板，每孔使用 25 μL 試劑而不是 50 μL。

2. 向MDA標(biāo)準(zhǔn)品、空白對照和測試樣品的每個孔中加入50 μL MDA工作溶液，使總測定體積為100 μL/孔。對于 384 孔板，向每個孔中加入 25 μL MDA 工作溶液，總體積為 50 μL/孔。

3. 將反應(yīng)在室溫下孵育10-30分鐘。

4. 向每個孔中加入 25 μL 反應(yīng)溶液（組分 D），使總測定體積為 125 μL/孔。對于 384 孔板，將 12.5 μL 反應(yīng)溶液（組分 D）添加到每個孔中，總體積為 62.5 μL/孔。

5. 將反應(yīng)在室溫下孵育30-60分鐘。

6. 用熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 365/435 nm（截止= 420 nm）監(jiān)測熒光增加。

  AAT Amplite比色法/熒光法丙二醛（MDA）

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